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  • 抗体验证的重要性

    2019-07-04

    据估计,因抗体质量不佳,生命科学领域每年的损失达到8亿美元。同时,这也造成了无数的实验失败,浪费了宝贵的样本和科学家的青春。尽管科学界已经意识到这个问题,但目前仍然缺乏抗体验证的整体框架。

    为了刺激研究界实现更高标准的抗体重复性,国际抗体验证工作组(IWGAV)近日出台了一套指南。这些指南发表在95日的《Nature Methods》杂志上,强调了抗体验证需要针对应用和背景来开展。

    这篇题为“A Proposal for Validation of Antibodies”的文章是由IWGAV的数名成员发表的,包括工作组主席、瑞典皇家理工学院的微生物学教授Mathias Uhlén。文章提出了五点,以指导特定应用中的抗体验证。

    遗传策略:测定对照细胞或组织中的相关信号,这些对照中的目标基因已利用CRISPRRNAi等技术敲除或敲低。

    正交策略:利用不依赖抗体的方法定量多个样品,然后检查依赖抗体和不依赖抗体这两种定量之间的相关性。

    独立抗体策略:利用两个或更多的独立抗体来识别目标蛋白上的不同表位,再通过比较和定量分析来确认特异性。

    表达标记蛋白:修饰内源的目标基因,增加亲和标签或荧光蛋白的序列。标记蛋白的信号可与基于抗体的检测相关联。

    免疫捕获加上质谱分析:将免疫捕获与MS分析相结合,以确定与纯化的抗体直接作用的蛋白质,以及可能与目标蛋白形成复合物的蛋白质。

    这篇文章还对生产商和使用者提出建议,以确保长期的抗体重复性。作者们建议使用者在自己特定的应用或样品中,至少运用上面的一种策略来开展验证。同时,他们还建议使用者按照一定的形式报告,包含货号、批号和RRID(研究资源标识符),以确保研究中使用的任何抗体可被明确识别。

    同时,作者们也向生产商提出了类似的建议,至少运用一种策略来验证,并提供尽可能多的抗体信息,如鉴定检测中的抗体浓度、细胞提取物的浓度、抗体生产所用的免疫原、抗体-表位的亲和力、缓冲液配方等。

     

     

     

    “这篇文章迈出了重要的第一步,有望制定出广泛接受的抗体验证标准,确保生命医学研究使用高质量且一致的抗体,”Uhlén博士表示。“我们期待抗体用户、出版商、资助机构和生产商的反馈,以帮助加强这个初步建议,并确保这些基本工具的可靠性。”在文章发布之后,抗体生产商之一 赛默飞世尔公司承诺,它将按照IWGAV的建议来验证其抗体的特异性。赛默飞表示,它将很好地遵循这个指南,并借助其领先的质谱、CRISPRsiRNA平台来开展验证。此外,对于通过新标准的抗体,公司会在网站上标注,以表示它通过特异性检测。

    赛默飞世尔的生命科学部门总裁Peter Silvester表示:“赛默飞世尔很高兴看到国际抗体验证工作组的第一个建议。我们相信,这些标准将有助于对抗用户在使用这些关键工具时面临的挑战。我们承诺按照IWGAV的标准来测试我们的抗体,这证明了我们对科学的承诺,以及我们提供特异抗体的使命。”


    文献:

    Uhlen M, Bandrowski A, Carr S, Edwards A, Ellenberg J, Lundberg E, Rimm DL, Rodriguez H, Hiltke T, Snyder M, Yamamoto T.A proposal for validation of antibodies.Nat Methods. 2016 Sep 5. doi: 10.1038/nmeth.3995.